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本试剂盒的一种颊粘膜细胞基因组DNA提取试剂盒。本制品采用Buffer ACL和CL裂解颊粘膜细胞，释放出基因组DNA，蛋白质和细胞碎片等杂质通过离心沉淀下来。将上清液转移到新的离心管中，在结合液的作用下特殊吸附膜选择性的吸附上清液中的基因组DNA。通过洗涤液的清洗完全除去吸附膜吸附的少量杂质。在洗脱液的作用下吸附膜释放吸附的基因组DNA，即获得高质量的基因组DNA。采用本制品提取颊粘膜细胞基因组DNA无需苯酚、氯仿等有毒试剂。获得DNA的OD260/OD280比值一般为1.7~1.9，抽提的DNA可直接用于下游实验。

组分	50T	100T
Buffer PBS	25mL	50mL
Buffer ACL	25mL	50mL
Buffer CL	12mL	24mL
TE Buffer(pH8.0)	5mL	10mL
Wash Solution	15mL	30mL
Proteinase K	1.2mL	2.4mL
吸附柱及收集管	50套	100套

保存：RT，其中Proteinase K需置于2～8℃。


小型高速离心机（最大离心力≥ 12000×g）、水浴锅、2mL离心管、无水乙醇和RNase A溶液（10mg/mL）。


Buffer ACL和Buffer CL中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助


每次使用前请检查Buffer ACL和Buffer CL是否出现沉淀，如有沉淀，请于65℃溶解后再使用。
试剂盒初次开启，按瓶身标签说明在Wash Solution中加入相应量的无水乙醇混匀，在瓶身做好标记。于室温密封保存（15mL Wash Solution加入45mL无水乙醇；30mL Wash Solution加入90mL无水乙醇）。

• 取样：采用口腔拭子在口腔内壁擦拭6～10次，晾干2h保存。
  
  • 为确保样本不被食物或者饮品污染，取样前30min内请勿进食和饮水。
• 将在口腔内壁擦拭过的口腔拭子用剪刀将棉签部分从其杆上剪下置于2mL离心管，向离心管中加入400μL Buffer PBS。
  
  • 如果需要无RNA的基因组DNA，可以向离心管中加入20μL 10mg/mL RNase A solution。
• 向离心管中加入400μL Buffer ACL，200μL Buffer CL和20μL Proteinase K，震荡混匀，65℃水浴10min，间或混匀。
  
• 向离心管中加入400μL无水乙醇，充分混匀，然后将全部溶液和沉淀物转移至硅胶膜吸附柱内（吸附柱放入收集管中），10000rpm离心1min，倒掉收集管中溶液，将吸附柱放回收集管中。
  
  • 吸附柱的最大容量为750μL，需要过两次吸附柱；如果后续实验需要基因组DNA浓度不是很高，可以只过一次吸附柱。
• 向吸附柱中加入500μL Wash Solution，10000rpm离心1min，倒掉收集管中溶液，将吸附柱放回收集管中。
  
  • Wash Solution使用前请检查溶液是否按比例加入无水乙醇。
• 重复步骤5一次。
  
• 将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心2min。
  
  • 此步决不能省略，否则残留的乙醇会严重影响后续实验。
• 取出吸附柱，放入一个新的1.5mL离心管中，在吸附膜中央加入50μL TE Buffer，静置3min，12000rpm离心2min，得到DNA溶液置于-20℃保存或者直接用于后续实验。
  
  • 如果想提高DNA的得率，可重复步骤8或将TE Buffer 60℃预热。

• 得率低
  
  • 口腔拭子保存不当导致细胞破裂DNA降解；请采用新鲜的口腔拭子，需要保存时请采用适当的保存液。
    
  • 口腔拭子种类繁多，最好采用植绒拭子，植绒拭子吸附和释放口腔细胞的性能最好，而且吸水性不好，更有利于细胞的裂解。
    
  • Wash Solution未加入无水乙醇或者无水乙醇的加量不正确，请严格按照Wash Solution瓶身上的标记加入正确的无水乙醇。
    
  • 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响，如果使用水进行洗脱，请确保其pH值> 7.5，pH值过低可能导致低洗脱效率。
    
  • 洗脱过程操作不当。请将洗脱液加入到吸附膜的中央位置。
• 获得的DNA条带弥散
  
  • 样品不新鲜。请尽量选择新鲜的样品。
    
  • 裂解时间过长。裂解时间不要超过30min。
• 获得的DNA断裂、降解
  
  • 样品没有按照要求保存。请使用新鲜样品，样品如果因为某些原因必须先行保存，可以将样品保存于-70℃冰箱。
    
  • 样品反复冻融。需要保存的样品应分割后保存于-70℃冰箱，避免反复冻融，确保样品的DNA未降解。
    
  • 操作过程过于剧烈，DNA被机械打断。请严格按照说明书操作。
• DNA样品不纯，抑制或者干扰后续实验反应
  
  • 乙醇有残留。请完成第二次洗涤之后，将吸附柱12000rpm 2min空甩，开盖室温干燥几分钟之后再进行洗脱。
• 利用琼脂糖凝胶电泳检验DNA时，加样孔非常亮
  
  • 大片段的基因组DNA由于难以电泳出加样孔，会使加样孔非常的亮。
    
  • 使用的琼脂糖凝胶浓度过高，建议使用0.8%的琼脂糖凝胶电泳。
    
  • 获得的DNA中含有蛋白质等杂质，建议适当减少样品用量。

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